蛋白生物標(biāo)志物已成為神經(jīng)科學(xué)研究的核心，尤其在神經(jīng)退行性疾病和神經(jīng)炎癥病癥的治療靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)方面。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA) 作為蛋白生物標(biāo)志物的主要檢測(cè)技術(shù)，雖具備良好的特異性和穩(wěn)健性，但傳統(tǒng)ELISA技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中仍存在操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、重復(fù)性有限、樣本需求量大以及僅能單因子檢測(cè)等局限。鑒于此，ProteinSimple開(kāi)發(fā)了全自動(dòng)免疫分析平臺(tái) Ella，集全自動(dòng)化、快速、高靈敏、多因子分析能力于一體，讓生物標(biāo)志物檢測(cè)更快！更準(zhǔn)！更省心！

采用 Ella全自動(dòng)免疫分析平臺(tái)定量檢測(cè)血漿和CSF中pTau-217的含量。結(jié)果表明，這種新型免疫檢測(cè)法可作為一種靈敏、精確、快速且易于使用的研究方法，用于檢測(cè)生物流體中的 pTau-217 蛋白。

01. 動(dòng)態(tài)范圍和定量限

圖1. pTau-217卡盒標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和動(dòng)態(tài)范圍

在多個(gè)檢測(cè)卡盒及不同批次卡盒上運(yùn)行曲線(xiàn)時(shí)，定量限(LOQ) 內(nèi)的所有點(diǎn)回收率均在80%-120% 之間，且變異系數(shù) (CV) 低于 20%。

通過(guò)對(duì)含有 pTau - 217的血漿樣本進(jìn)行系列稀釋?zhuān)瑯颖局锌乖椒謩e高于和低于定量下限 (LLOQ) 閾值，從而對(duì)定量下限進(jìn)行進(jìn)一步確認(rèn)。結(jié)果顯示，在定量限范圍內(nèi)的所有樣本，回收率均在 80% 至 120% 之間，變異系數(shù) (CV) ≤20% 。

02. 檢測(cè)性能

(1) 精確度

圖3. pTau-217卡盒檢測(cè)精確度

左圖：將低濃度和高濃度的對(duì)照樣本在三個(gè)不同批次的Ella卡盒中重復(fù)檢測(cè) (n=6) 。結(jié)果顯示，批間變異系數(shù)CV均 ≤5%，該檢測(cè)平臺(tái)的批內(nèi)精確度高。右圖：由多名操作人員使用2個(gè)批次多個(gè)檢測(cè)卡盒以及多臺(tái)Ella分析儀，對(duì)高濃度 (紅色) 和低濃度 (藍(lán)色) 的對(duì)照樣本進(jìn)行制備和檢測(cè)。結(jié)果顯示，批間精確度高 (變異系數(shù) CV≤12%) 。

(2) 批次間一致性

圖4. pTau-217卡盒檢測(cè)批次間可重復(fù)性

通過(guò)在兩個(gè)獨(dú)立批次的卡盒上運(yùn)行檢測(cè)濃度值在檢測(cè)范圍內(nèi)的不同樣本，來(lái)評(píng)估卡盒批次間的重現(xiàn)性。結(jié)果表明，通過(guò)Bland-Altman分析 (左圖) 和線(xiàn)性回歸分析 (右圖) ，不同批次卡盒的檢測(cè)濃度值具有可接受的等效性。

(3) 線(xiàn)性稀釋和摻入回收

圖5. 血漿和CSF樣本線(xiàn)性稀釋回收

所有血漿和腦脊液樣本均表現(xiàn)出良好的線(xiàn)性回收，平均回收率均在80%到120%之間 (血漿的平均回收率為100%，腦脊液的平均回收率為94%) 。

圖6. 血漿和CSF樣本摻入回收

準(zhǔn)確性通過(guò)在血漿和腦脊液中進(jìn)行摻入回收實(shí)驗(yàn)評(píng)估，使用三種不同濃度 (高/中/低濃度) 的摻入分析物來(lái)評(píng)估。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加了 EDTA 的血漿樣本回收率為89%，而腦脊液樣本的平均回收率為127%。

03. 臨床樣本檢測(cè)

圖7. pTau-217在健康供體和AD患者血漿和腦脊液中的檢測(cè)

血漿 (左側(cè)) 和腦脊液 (右側(cè)) 中的pTau-217水平在健康供體與臨床診斷的阿爾茨海默病患者之間進(jìn)行了比較。與健康對(duì)照組及ATN陰性患者相比，ATN陽(yáng)性患者 (ATN+) 在血漿和腦脊液中的pTau-217顯著升高。在比較ATN+和淀粉樣蛋白陽(yáng)性 (A+) 患者組時(shí)，也發(fā)現(xiàn)了腦脊液pTau水平的顯著差異。統(tǒng)計(jì)分析使用了Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，隨后進(jìn)行了Dunn’s多重比較事后檢驗(yàn)。

04. 多平臺(tái)檢測(cè)一致性

圖8. Ella平臺(tái)與Simoa平臺(tái)平行評(píng)估血漿中pTau-217含量

圖9. 二種檢測(cè)平臺(tái)的相關(guān)性

上圖：使用 Simple Plex pTau - 217 ALZpath 檢測(cè)法與基于微珠的平臺(tái) (Simoa pTau - 217 ALZpath 檢測(cè)法) 并行測(cè)量血漿 pTau - 217 含量比較。兩種平臺(tái)均顯示，在阿爾茨海默病 (AD) 患者樣本 (ATN 表型) 中，pTau - 217 水平顯著升高 (p < 0.001)。下圖：兩種平臺(tái)的相關(guān)性分析。

綜上結(jié)果表明，這種新型免疫檢測(cè)法Ella可作為一種靈敏、精確、快速且易于使用的研究方法，用于測(cè)量生物樣本中的pTau - 217蛋白含量。

Ella神經(jīng)退行性疾病的分析指標(biāo)清單

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